28°C ನಲ್ಲಿ 25 ದಿನಗಳ ಸ್ಥಿರ ಕಾವು ನಂತರ, *ಪ್ಲ್ಯೂರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* NRC620 ನಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಶಿಲೀಂಧ್ರ ಕೃಷಿ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಧಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿತು. ಈ ಕಿಣ್ವಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ತವಾದ pH ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನ ಮೌಲ್ಯಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ 3.0 ಮತ್ತು 70°C ಆಗಿದ್ದವು. 40°C ಮತ್ತು 50°C ನಲ್ಲಿ 2 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾವು ನಂತರ, ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆ ಕ್ರಮವಾಗಿ 68.33% ಮತ್ತು 59.61% ಅನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಂಡವು. ಸಿಟ್ರೇಟ್-ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ನಲ್ಲಿ (pH 7.0) 2 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾವು ನಂತರ, ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆ 100% ನಲ್ಲಿ ಉಳಿಯಿತು. 10 mM MgSO₄ ಮತ್ತು CuSO₄ ಸೇರ್ಪಡೆಯು ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಸುಮಾರು 21% ಮತ್ತು 35% ರಷ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು, ಆದರೆ NaCl, MnCl₂, KCl ಮತ್ತು CaCl₂ ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಿತು. ABTS ಅನ್ನು ತಲಾಧಾರವಾಗಿ ಬಳಸಿದಾಗ, *ಪ್ಲುರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* NRC 620 ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ಚಲನ ನಿಯತಾಂಕಗಳು (Km ಮತ್ತು Vmax) ಕ್ರಮವಾಗಿ 1.99 mM ಮತ್ತು 16,217 μmol min−1 L−1 ಆಗಿದ್ದವು. ಸೇಬಿನ ರಸದ ಮಾದರಿಗಳ ಕಿಣ್ವಕ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು pH ಮತ್ತು ಸ್ನಿಗ್ಧತೆ ಎರಡನ್ನೂ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು ಮತ್ತು ಈ ಕಡಿತವು ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯದ ಹೆಚ್ಚಳದೊಂದಿಗೆ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧ ಹೊಂದಿದೆ. ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಸೇಬಿನ ರಸದ ಒಟ್ಟು ಫೀನಾಲಿಕ್ ಅಂಶದಲ್ಲಿ ಸ್ವಲ್ಪ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಯಿತು, ಆದರೆ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಕಡಿತ ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ.
ಇತ್ತೀಚಿನ ವರ್ಷಗಳಲ್ಲಿ, ಸಂಶೋಧಕರು ಆಹಾರ ಉದ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಹಸಿರು ಜೈವಿಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದ ಅನ್ವಯದ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಿದ್ದಾರೆ. ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಆಹಾರ ಉದ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಂತ ಉಪಯುಕ್ತ ಕಿಣ್ವಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ, ರಸ ಸಂಸ್ಕರಣೆ, ಬೇಕಿಂಗ್, ವೈನ್ ಸ್ಥಿರೀಕರಣ ಮತ್ತು ಆಹಾರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಆರ್ಗನೊಲೆಪ್ಟಿಕ್ ಗುಣಗಳನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುವಂತಹ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳಲ್ಲಿ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳನ್ನು ಕಂಡುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.1ಅನೇಕ ಉನ್ನತ ಸಸ್ಯಗಳು ಮತ್ತು ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಗಳು ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಅನ್ನು ಸ್ರವಿಸುತ್ತವೆ,2ಮತ್ತು ಡ್ಯೂಟೆರೊಮೈಸೆಟ್ಸ್, ಆಸ್ಕೋಮೈಸೆಟ್ಸ್ ಮತ್ತು ಬೇಸಿಡಿಯೊಮೈಸೆಟ್ಸ್ನಂತಹ ಶಿಲೀಂಧ್ರಗಳು ಸಹ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಬಹುದು.3ಲ್ಯಾಕೇಸ್ (EC 1.10.3.2) ಒಂದು ನೀಲಿ ಆಕ್ಸಿಡೇಸ್ ಆಗಿದ್ದು, ಇದು ಮೂರು ವಿಭಿನ್ನ ತಾಮ್ರ ಪರಮಾಣುಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಆಣ್ವಿಕ ಆಮ್ಲಜನಕವನ್ನು ನೀರಿಗೆ ಇಳಿಸುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ವಿವಿಧ ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಮತ್ತು ಆರೊಮ್ಯಾಟಿಕ್ ಅಮೈನ್ಗಳನ್ನು ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಿಸುತ್ತದೆ. ಹಣ್ಣು ಮತ್ತು ತರಕಾರಿ ರಸಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಕಿಣ್ವಕ ಮತ್ತು ಕಿಣ್ವಕವಲ್ಲದ ಕಂದು ಬಣ್ಣವು ನಿರ್ಣಾಯಕ ಸಮಸ್ಯೆಗಳಾಗಿವೆ.4ಈ ವಸ್ತುಗಳು ರಸದ ಬಣ್ಣ, ಸುವಾಸನೆ ಮತ್ತು ಸುವಾಸನೆಯ ಮೇಲೆ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುವುದರಿಂದ, ಅವುಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಬೇಕು.5
ಎಲ್ಲಾ ಹಣ್ಣುಗಳಲ್ಲಿ, ಸೇಬುಗಳು ವಿಶ್ವಾದ್ಯಂತ ಮತ್ತು ಯುರೋಪಿಯನ್ ಒಕ್ಕೂಟದಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚು ಸೇವಿಸಲ್ಪಡುತ್ತವೆ. 2019 ರಲ್ಲಿ, ಸೇಬು ಉತ್ಪಾದನೆಯು ಜಾಗತಿಕವಾಗಿ ಮೂರನೇ ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿದೆ, 87 ಮಿಲಿಯನ್ ಟನ್ಗಳನ್ನು ಮೀರಿದೆ.6ಸೇಬುಗಳು ಹಲವಾರು ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತವೆ, ಅವುಗಳಲ್ಲಿ ಫ್ಲೇವನಾಯ್ಡ್ಗಳು ಮತ್ತು ಕೆಫೀಕ್ ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಕ್ಲೋರೊಜೆನಿಕ್ ಆಮ್ಲದಂತಹ ಫೀನಾಲಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳು ಸೇರಿವೆ.7ಸೇಬಿನ ರಸವನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಅದರ ಸ್ಪಷ್ಟ ರೂಪದಲ್ಲಿ ಸೇವಿಸುವುದರಿಂದ, ಶೋಧನೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಸರಿಸುಮಾರು 50% ರಿಂದ 90% ರಷ್ಟು ಫೀನಾಲಿಕ್ ಘಟಕಗಳು ಕಳೆದುಹೋಗುತ್ತವೆ.8ಇಂದು, ಗ್ರಾಹಕರು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪಾಲಿಫಿನಾಲ್ ಅಂಶವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಮೋಡದ ಸೇಬಿನ ರಸದಂತಹ ಕನಿಷ್ಠ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಉತ್ಪನ್ನಗಳನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡುತ್ತಾರೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಅದರ ಹೆಚ್ಚಿನ ಫೀನಾಲಿಕ್ ಅಂಶದಿಂದಾಗಿ, ಈ ರೀತಿಯ ಸೇಬಿನ ರಸವು ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಬಣ್ಣ ಬದಲಾವಣೆ ಮತ್ತು ಕಪ್ಪಾಗುವಿಕೆಗೆ ಒಳಗಾಗುತ್ತದೆ.9ಸೇಬಿನ ರಸ ಕಪ್ಪಾಗುವುದನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ಅಥವಾ ತಡೆಯಲು 60–90°C ನಲ್ಲಿ ಪಾಶ್ಚರೀಕರಣದಂತಹ ಶಾಖ ಸಂಸ್ಕರಣಾ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ವಿವಿಧ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.10ಆದಾಗ್ಯೂ, Sauceda-Gálvez ಸಂಶೋಧನೆಯ ಪ್ರಕಾರ11, ಉಷ್ಣ ಸಂಸ್ಕರಣೆಯು ಬಾಷ್ಪಶೀಲ ರಾಸಾಯನಿಕಗಳನ್ನು ನಾಶಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸೇಬಿನ ರಸದ ಆರ್ಗನೊಲೆಪ್ಟಿಕ್ ಗುಣಗಳ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ. ಉಷ್ಣ ಸಂಸ್ಕರಣಾ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಪರ್ಯಾಯಗಳಲ್ಲಿ ಸೂಪರ್ಕ್ರಿಟಿಕಲ್ ಕಾರ್ಬನ್ ಡೈಆಕ್ಸೈಡ್, ನೇರಳಾತೀತ ವಿಕಿರಣ, ಅಲ್ಟ್ರಾಸೌಂಡ್, ಹೆಚ್ಚಿನ ಹೈಡ್ರೋಸ್ಟಾಟಿಕ್ ಒತ್ತಡ ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಿನ ಒತ್ತಡದ ಏಕರೂಪೀಕರಣ ಸೇರಿವೆ.12ಈ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳ ದಕ್ಷತೆ ಮತ್ತು ಸೂಕ್ತವಾದ ಹಣ್ಣಿನ ರಸಗಳ ಇಳುವರಿಯು ಬಳಸಿದ ನಿಯತಾಂಕಗಳು ಮತ್ತು ಉತ್ಪನ್ನ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ. ಅವುಗಳ ವ್ಯಾಪಕ ಬಳಕೆಯು ಹೆಚ್ಚಿನ ವೆಚ್ಚಗಳು, ಕೆಲವು ಆಹಾರ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ ಗುಣಮಟ್ಟದ ಮೇಲೆ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಪರಿಣಾಮಗಳು ಅಥವಾ ಅಸಮರ್ಪಕ ಕಿಣ್ವ ನಿಷ್ಕ್ರಿಯತೆಯಿಂದ ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ.13,14
ಹಣ್ಣಿನ ರಸವನ್ನು ಸ್ಥಿರಗೊಳಿಸಲು ಮತ್ತು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸಲು ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಅನ್ನು ಬಳಸಬಹುದು.15ಗೋಕ್ಮೆನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು.16ಹಣ್ಣಿನ ರಸದ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಇದು ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಪಾಲಿಮರ್ಗಳು ಅಥವಾ ಆಲಿಗೋಮರ್ಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ, ಇವುಗಳನ್ನು ಯಾವುದೇ ಅಲ್ಟ್ರಾಫಿಲ್ಟ್ರೇಶನ್ ಪೊರೆಯಿಂದ ಸುಲಭವಾಗಿ ತೆಗೆಯಬಹುದು, ಇದು ಸೇಬಿನ ರಸವು 50°C ನಲ್ಲಿ ಆರು ವಾರಗಳವರೆಗೆ ಸ್ಥಿರವಾದ ಬಣ್ಣ ಮತ್ತು ಸ್ಪಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಕಾಪಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ *ಟ್ರೈಕೋಡರ್ಮಾ* ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಅನ್ನು ಅಲ್ಯೂಮಿನಾ ಮಣಿಗಳ ಮೇಲೆ ನಿಶ್ಚಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಸೇಬಿನ ರಸದ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಯ ಮಾಲಿನ್ಯದಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಸುವಾಸನೆಯಿಲ್ಲದ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಆಯ್ದವಾಗಿ ತೆಗೆದುಹಾಕಲು ಬಳಸಲಾಯಿತು.17
ಸೇಬಿನ ರಸದ ಸುಮಾರು 80-90% ರಷ್ಟು ಬಾಷ್ಪಶೀಲ ಘಟಕಗಳು ಎಸ್ಟರ್ಗಳು ಮತ್ತು ಆಲ್ಡಿಹೈಡ್ಗಳಾಗಿವೆ, ಇದು ರಸಕ್ಕೆ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಪರಿಮಳವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ.18*ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ವರ್ಸಿಕಲರ್* ನ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಅನ್ನು ಸೇಬಿನ ರಸದ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಎಳೆಯ ತೆಂಗಿನ ಚಿಪ್ಪುಗಳಿಂದ ತಯಾರಿಸಿದ ನೈಸರ್ಗಿಕ ನಾರಿನಿಂದ ತಯಾರಿಸಿದ ಅಗ್ಗದ ಬೆಂಬಲದ ಮೇಲೆ ನಿಶ್ಚಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು.19ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಕಿಣ್ವ-ಮುಕ್ತ ಅಥವಾ ನಿಶ್ಚಲ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಅಥವಾ ಅಲ್ಟ್ರಾಫಿಲ್ಟ್ರೇಶನ್ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಿ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಸ್ಥಿರೀಕರಣವನ್ನು (ಬಣ್ಣ ಮತ್ತು ಟರ್ಬಿಡಿಟಿ) ತನಿಖೆ ಮಾಡಿವೆ.5,19ಆದಾಗ್ಯೂ, ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಭೌತ ರಾಸಾಯನಿಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳ ಮೇಲೆ ಶಿಲೀಂಧ್ರ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳ ಪರಿಣಾಮವು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿಲ್ಲ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಈ ಅಧ್ಯಯನದ ಉದ್ದೇಶವು ಶಿಲೀಂಧ್ರ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಿದ ನಂತರ ಮತ್ತು ಎರಡು ವಾರಗಳ ಶೈತ್ಯೀಕರಣದ ನಂತರ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಭೌತ ರಾಸಾಯನಿಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು, ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತ ಅಂಶ ಮತ್ತು ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯಲ್ಲಿನ ಬದಲಾವಣೆಗಳನ್ನು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ ತನಿಖೆ ಮಾಡುವುದು. ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳು ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ, ಇದು ರಸ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣ ಸೇರಿದಂತೆ ವಿವಿಧ ಕೈಗಾರಿಕಾ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಕೆಗೆ ಭರವಸೆ ನೀಡುತ್ತದೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನವು *ಪ್ಲ್ಯೂರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* NRC 620 ರಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿತು, ರಸ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣದಲ್ಲಿ ಅವುಗಳ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವಕ್ಕೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳ ಮೇಲೆ ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸಿತು. ಸಿಂಪಿ ಅಣಬೆಗಳ ಮೇಲಿನ ಸಂಶೋಧನೆ (P. ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್ NRC 620) ಇನ್ನೂ ಸೀಮಿತವಾಗಿದ್ದರೂ, ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳು ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ವರ್ಸಿಕಲರ್ ಮತ್ತು ಗ್ಯಾನೋಡರ್ಮಾ ಲುಸಿಡಮ್ನಂತಹ ವಿವಿಧ ಶಿಲೀಂಧ್ರ ಮೂಲಗಳಿಂದ ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ಪರೀಕ್ಷಿಸಿವೆ. ಆಹಾರ ಉದ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಈ ಕಿಣ್ವದ ಸಂಭಾವ್ಯ ಅನ್ವಯವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡುವುದು ಮತ್ತು ಅದರ ವಿಶಿಷ್ಟ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಅದರ ಆದರ್ಶ pH ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಹೈಲೈಟ್ ಮಾಡುವುದು ಈ ಅಧ್ಯಯನದ ಉದ್ದೇಶವಾಗಿತ್ತು.
2,2′-ಅಜೂಕ್ಸಿಬಿಸ್(3-ಈಥೈಲ್ಬೆನ್ಜೋಥಿಯಾಜೋಲಿನ್-6-ಸಲ್ಫೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ) (ABTS) ಅನ್ನು ಸಿಗ್ಮಾ-ಆಲ್ಡ್ರಿಚ್ (ಕೆನಡಾ) ನಿಂದ ಖರೀದಿಸಲಾಗಿದೆ. ಎಲ್ಲಾ ಇತರ ಕಾರಕಗಳು ವಿಶ್ಲೇಷಣಾತ್ಮಕ ದರ್ಜೆಯವು.
ರಾಷ್ಟ್ರೀಯ ಸಂಶೋಧನಾ ಕೇಂದ್ರದ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಸಂಗ್ರಹಣಾ ಕೇಂದ್ರವು ತಿಳಿದಿರುವ ಸಿಂಪಿ ಮಶ್ರೂಮ್ ತಳಿ NRC620 ಅನ್ನು ಪಡೆದುಕೊಂಡಿತು. ಉಪಸಂಸ್ಕೃತಿಯ ನಂತರ, ಈ ತಳಿಯನ್ನು ಆಲೂಗಡ್ಡೆ ಡೆಕ್ಸ್ಟ್ರೋಸ್ ಅಗರ್ ಸ್ಲ್ಯಾಂಟ್ಗಳಲ್ಲಿ 4°C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಯಿತು. ಇನಾಕ್ಯುಲಮ್ ತಯಾರಿಕೆಯ ವಿಧಾನವು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತಿತ್ತು: 10 ದಿನಗಳ ಹಳೆಯ, ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಅಭಿವೃದ್ಧಿ ಹೊಂದಿದ ಮೈಸೀಲಿಯಮ್ ಅನ್ನು ಆಲೂಗಡ್ಡೆ ಡೆಕ್ಸ್ಟ್ರೋಸ್ ಅಗರ್ ಪ್ಲೇಟ್ಗಳ ಮೇಲೆ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದು ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು 28°C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. 10 ದಿನಗಳ ನಂತರ, 12-ಮಿಮೀ ವ್ಯಾಸದ ಮೂರು ಮೈಸೀಲಿಯಲ್ ಬ್ಲಾಕ್ಗಳನ್ನು ಅಗರ್ ಮಾಧ್ಯಮದಿಂದ ಸ್ಟೆರೈಲ್ ಮೆಟಲ್ ಪಂಚ್ ಬಳಸಿ ತೆಗೆದು 250-ಮಿಲೀ ಎರ್ಲೆನ್ಮೇಯರ್ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್ಗಳಲ್ಲಿ 50 ಮಿಲಿ ಸ್ಟೆರೈಲ್ ಕಲ್ಚರ್ ಮಾಧ್ಯಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಹತ್ತಿ ಪ್ಲಗ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಇರಿಸಲಾಯಿತು (pH 5.0, ಓಥ್ಮನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ಹಿಂದೆ ವಿವರಿಸಿದಂತೆ.20). ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು 28°C ನಲ್ಲಿ 18 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಸಂಸ್ಕೃತಿಗಳನ್ನು ವಾಟ್ಮ್ಯಾನ್ ನಂ. 1 ಫಿಲ್ಟರ್ ಪೇಪರ್ ಮೂಲಕ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಬರುವ ಸೂಪರ್ನೇಟಂಟ್ ಕಿಣ್ವದ ಮೂಲವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಿತು.
ABTS ಅನ್ನು ತಲಾಧಾರವಾಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು. ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ಮಿಶ್ರಣವು (2 mL) 0.3 mM ABTS ನ 500 μL (0.1 M ಸೋಡಿಯಂ ಸಿಟ್ರೇಟ್ ಬಫರ್, pH 4.5 ನಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಲಾಗಿದೆ) ಮತ್ತು ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಪ್ರಮಾಣದ ಕಿಣ್ವ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸಲಾಯಿತು.21,22ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ (28 °C ± 2) ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ABTS ಅನ್ನು ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಿಸಬಹುದು ಎಂದು ಪರಿಗಣಿಸಿ, 420 nm (ε) ನಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯ ಹೆಚ್ಚಳವನ್ನು ಅಳೆಯುವ ಮೂಲಕ ABTS ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು.420 (420)= 36,000 ಸೆಂ.ಮೀ.-1 M -1) ಎಜಿಲೆಂಟ್ ಕ್ಯಾರಿ-100 UV ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಬಳಸಿ. ಪ್ರತಿ ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 1 μmol ABTS ಅನ್ನು ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಿಸಲು ಒಂದು ಯೂನಿಟ್ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಅಗತ್ಯವಿದೆ. ಗೋವಿನ ಸೀರಮ್ ಅಲ್ಬುಮಿನ್ ಅನ್ನು ಆಂತರಿಕ ನಿಯಂತ್ರಣವಾಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಬ್ರಾಡ್ಫೋರ್ಡ್ ವಿಧಾನದಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು.23,24
NRC 620 ಎಂಬ ಸಿಂಪಿ ಮಶ್ರೂಮ್ ತಳಿಯಿಂದ ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಪಡೆದ ನಂತರ, ಅದರ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು 28 °C ನಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ 25 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ವಿವಿಧ ಕೃಷಿ ಮಧ್ಯಂತರಗಳಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು.
ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ತಾಪಮಾನದ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು, 20 ರಿಂದ 90 °C ವರೆಗಿನ ತಾಪಮಾನ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಯಿತು. ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸುವ ಮೊದಲು, ಬಫರ್ (0.1 M ಸೋಡಿಯಂ ಸಿಟ್ರೇಟ್, pH 4.5) ಮತ್ತು ತಲಾಧಾರವನ್ನು (ABTS) ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡಿ ವಿವಿಧ ತಾಪಮಾನಗಳಲ್ಲಿ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. 0.05 M ಸೋಡಿಯಂ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ (pH 7.0) ನಲ್ಲಿ ಕ್ರಮವಾಗಿ 40, 50, 60 ಮತ್ತು 70 °C ನಲ್ಲಿ 2 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡುವ ಮೂಲಕ ಕಿಣ್ವದ ಉಷ್ಣ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು. ನಂತರ ABTS ತಲಾಧಾರವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಉಳಿದ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು.
2.5 ರಿಂದ 7.0 pH ವ್ಯಾಪ್ತಿಯನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 0.1 M ಸಿಟ್ರೇಟ್-ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ಗಳಲ್ಲಿ ABTS ಅನ್ನು ತಲಾಧಾರವಾಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ pH ನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು. pH ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲು ಕಿಣ್ವ ದ್ರಾವಣವನ್ನು 40°C ನಲ್ಲಿ 0.1 M ಸಿಟ್ರೇಟ್ ಮತ್ತು ಟ್ರಿಸ್ ಬಫರ್ಗಳಲ್ಲಿ (pH 3, 4, 6, ಮತ್ತು 7) ಎರಡು ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. ABTS ಅನ್ನು ತಲಾಧಾರವಾಗಿ ಹೊಂದಿರುವ ಉಳಿದ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕಾವುಕೊಟ್ಟ ನಂತರ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು.
ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಅನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ 2.5 mM ಮತ್ತು 10 mM ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ಲೋಹದ ಅಯಾನುಗಳನ್ನು (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, ಮತ್ತು Mn2+) ಹೊಂದಿರುವ ಸೋಡಿಯಂ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ನಲ್ಲಿ (0.05 M, pH 7.0) 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. ನಂತರ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಲು ತಲಾಧಾರವನ್ನು (ABTS) ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಸಾಪೇಕ್ಷ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು.
ಚಲನಶೀಲ ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು (Vmax ಮತ್ತು Km) ನಿರ್ಧರಿಸಲು ವಿವಿಧ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ (0.025–3 mM) ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನಿಂದ ABTS ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣವನ್ನು pH 4.5 ನಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು.ಸ್ಥಿರಾಂಕಗಳುಮೈಕೆಲಿಸ್-ಮೆಂಟೆನ್ ಸಮೀಕರಣದ ರೇಖೆಗಳನ್ನು ಲೈನ್ವೀವರ್-ಬರ್ಕ್ ನಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ, ಇದು ತಲಾಧಾರ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಕಾರ್ಯವಾಗಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ದರದ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ರೂಪಿಸುತ್ತದೆ. ಗ್ರಾಫ್ಪ್ಯಾಡ್ ಪ್ರಿಸ್ಮ್ ಆವೃತ್ತಿ 6.01 ಸಾಫ್ಟ್ವೇರ್ ಬಳಸಿ ಲೈನ್ವೀವರ್-ಬರ್ಕ್ ನಕ್ಷೆಯಿಂದ ಚಲನ ಸ್ಥಿರಾಂಕಗಳನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗಿದೆ.
ಸೇಬುಗಳನ್ನು ಟ್ಯಾಪ್ ನೀರಿನಿಂದ ಚೆನ್ನಾಗಿ ತೊಳೆದ ನಂತರ, ಅವುಗಳನ್ನು ಅರ್ಧದಷ್ಟು ಕತ್ತರಿಸಿ ಸಂಪೂರ್ಣ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ಬ್ರೌನ್ MP80 ಆಪಲ್ ಜ್ಯೂಸರ್ (ಜರ್ಮನಿಯಲ್ಲಿ ತಯಾರಿಸಲಾಗಿದೆ) ಬಳಸಿ ರಸ ತೆಗೆಯಲಾಯಿತು. ರಸವನ್ನು ನಾಲ್ಕು ಪದರಗಳ ಚೀಸ್ಕ್ಲೋತ್ ಮೂಲಕ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿಗೆ ಯಾವುದೇ ಕಿಣ್ವಗಳನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ, ಆದರೆ 2.0% ಲ್ಯಾಕೇಸ್ (ಪರೀಕ್ಷಿತ ಅತ್ಯಂತ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಸಾಂದ್ರತೆ) ಅನ್ನು ಹೊಸದಾಗಿ ತಯಾರಿಸಿದ ಸೇಬಿನ ರಸಕ್ಕೆ ಸೇರಿಸಲಾಯಿತು, ನಂತರ ಅದನ್ನು 4 ° C ನಲ್ಲಿ ಎರಡು ವಾರಗಳವರೆಗೆ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾಯಿತು.
ಬೌಲ್ಟನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ನಡೆಸಿದ ವಿಧಾನದ ಪ್ರಕಾರ ಟೈಟ್ರೇಟೇಬಲ್ ಆಮ್ಲೀಯತೆ (TA) ಮತ್ತು pH ಅನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು.ಆಲ್.27. ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಯ pH ಅನ್ನು ಡಿಜಿಟಲ್ pH ಮೀಟರ್ (JENWAY 3510 pH ಮೀಟರ್) ಬಳಸಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಟೈಟ್ರೇಟೇಬಲ್ ಆಮ್ಲೀಯತೆಯನ್ನು (TA) ಈ ಕೆಳಗಿನ ಸೂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮಾಲಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು.
ಇಲ್ಲಿ V ಮತ್ತು C ಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಟೈಟರೇಶನ್ನಲ್ಲಿ ಬಳಸುವ ಸೋಡಿಯಂ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್ ದ್ರಾವಣದ ಪರಿಮಾಣ (mL) ಮತ್ತು ಸಾಂದ್ರತೆ (0.1 mol/L) ಆಗಿರುತ್ತವೆ. K ಎಂಬುದು ಮ್ಯಾಲಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಪರಿವರ್ತನೆ ಗುಣಾಂಕವಾಗಿದ್ದು, ಇದು 0.067 ಕ್ಕೆ ಸಮಾನವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು W ಎಂಬುದು ಸೇಬಿನ ರಸದ ದ್ರವ್ಯರಾಶಿ (g) ಆಗಿದೆ.
ಒಟ್ಟು ಕರಗುವ ಘನವಸ್ತುಗಳು (ಟಿಡಿಎಸ್) ಎಲ್ಲಾ ರಸ ಮಾದರಿಗಳ ವಿಷಯವನ್ನು PAL-1 ಪಾಕೆಟ್ ವಕ್ರೀಭವನ ಮಾಪಕ (ATAGO, ಟೋಕಿಯೊ, ಜಪಾನ್) ಬಳಸಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು. ಪ್ರತಿ ಅಳತೆಯ ನಂತರ, ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಲೆನ್ಸ್ ಅನ್ನು ಅಯಾನೀಕರಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ತೊಳೆಯಲಾಯಿತು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿ ಸೇಬಿನ ರಸ ಮಾದರಿಯನ್ನು ಮೂರು ಬಾರಿ ಪರೀಕ್ಷಿಸಲಾಯಿತು. ಪ್ರತಿ ಮಾದರಿಯ ಮೌಲ್ಯವನ್ನು ಮೂರು ಅಳತೆಗಳ ಸರಾಸರಿಯಿಂದ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು. ಪ್ರತಿ ಸೇಬಿನ ರಸ ಮಾದರಿಗೆ ಸರಾಸರಿ ± ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಿಚಲನವನ್ನು ಸಹ ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಸರಾಸರಿ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು.
ಸೇಬಿನ ರಸದ ಮಾದರಿಗಳ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯ ಸ್ಥಿತಿಸ್ಥಾಪಕತ್ವವನ್ನು ತಿರುಗುವಿಕೆಯ ವಿಸ್ಕೋಮೀಟರ್ (RV, ರಿಯೋಟೆಸ್ಟ್ 2, ಜರ್ಮನಿ) ಬಳಸಿ ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು. ಮಾದರಿಯನ್ನು ವಿಸ್ಕೋಮೀಟರ್ನ “S2″ ಸಿಲಿಂಡರ್ ಒಳಗೆ ಇರಿಸಲಾಯಿತು. ಸ್ಪಷ್ಟ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯನ್ನು ಶಿಯರ್ ಒತ್ತಡದ ಇಳಿಜಾರಿನ ವಿರುದ್ಧ ಶಿಯರ್ ದರ ವಕ್ರರೇಖೆಯಿಂದ ಪ್ರತಿನಿಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು ಶಿಯರ್ ಒತ್ತಡ ಮತ್ತು ವಿವಿಧ ಶಿಯರ್ ದರಗಳಲ್ಲಿ ಅನುಗುಣವಾದ ವಕ್ರರೇಖೆಗಳಿಂದ ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ (1.00 ರಿಂದ 437.4 s⁻¹ ವರೆಗೆ). ಸ್ಪಷ್ಟ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಾಚಾರ ಮಾಡುವ ಸೂತ್ರವು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತಿರುತ್ತದೆ:
ಇಲ್ಲಿ η ಎಂಬುದು ಸ್ಪಷ್ಟ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆ (cP), τ ಎಂಬುದು ಶಿಯರ್ ಒತ್ತಡ (dyn/cm²), γ ಎಂಬುದು ಶಿಯರ್ ದರ (sec⁻¹), ಮತ್ತು (τ) ಅನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಸೂತ್ರವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಟಾರ್ಕ್ (α) ಮತ್ತು ಸಿಲಿಂಡರ್ (Z) ಮೌಲ್ಯಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ: τ = Z. α.
ಬ್ರೌನಿಂಗ್ ಸೂಚ್ಯಂಕವನ್ನು ಮೇಡವೆಟ್ ವಿಧಾನದ ಪ್ರಕಾರ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತುಆಲ್.29. 10-ಮಿಲಿ ರಸದ ಮಾದರಿಯನ್ನು 2750 xg ನಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮಾಡಲಾಯಿತು. 5 ಮಿಲಿ ರಸದ ಸೂಪರ್ನೇಟಂಟ್ ಅನ್ನು 5 ಮಿಲಿ 95% ಎಥೆನಾಲ್ ನೊಂದಿಗೆ ಬೆರೆಸಲಾಯಿತು. ಶಿಮಾಡ್ಜು UV ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ (UV-1601 PC) ಬಳಸಿ ಮಿಶ್ರಣದ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು 420 nm ನಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು.
ಬೌಲ್ಟನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ವಿವರಿಸಿದಂತೆ ಫೋಲಿನ್-ಸಿಯೊಕಾಲ್ಟಿಯು ಕಾರಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಒಟ್ಟು ಫೀನಾಲಿಕ್ ಅಂಶವನ್ನು (TPC) ವರ್ಣಮಾಪನದ ಮೂಲಕ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು.[27]]. 0 ರಿಂದ 500 mg/L ವರೆಗಿನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಿಗೆ ಗ್ಯಾಲಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸಲಾಗಿದೆ (ಆರ್²= 0.997). ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಗ್ಯಾಲಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಸಮಾನಾರ್ಥಕಗಳಾಗಿ ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ (mg GAE/mL).
25 μL ಸೇಬಿನ ರಸಕ್ಕೆ 125 μL ಡಿಸ್ಟಿಲ್ಡ್ ವಾಟರ್ ಮತ್ತು 2850 μL FRAP ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ ಇರಿಸಿ.30ನಿಮಿಷ. ನಂತರ ಶಿಮಾಡ್ಜು UV ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ (UV-1601 PC) ಬಳಸಿ 593 nm ನಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಿರಿ. FRAP ಕಾರಕವನ್ನು 300 mM ಅಸಿಟೇಟ್ ಬಫರ್ (pH 3.6), 20 mM ಕಬ್ಬಿಣ (III) ಕ್ಲೋರೈಡ್ ಮತ್ತು 10 mM 2,4,6-ಟ್ರಿಸ್ (2-ಪಿರಿಡೈಲ್) ಟ್ರೈಜಿನ್ (TPTZ) (40 mM HCl ನಲ್ಲಿ ಕರಗಿದ) 10:1:1 ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿ ಮಿಶ್ರಣ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ತಯಾರಿಸಲಾಯಿತು. ಟ್ರೋಲಾಕ್ಸ್ ಅನ್ನು ಮಾನದಂಡವಾಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರಮಾಣಿತ ವಕ್ರರೇಖೆಯನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲಾಯಿತು (ಆರ್²= 0.999), ಮತ್ತು ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು μM ಟ್ರೋಲಾಕ್ಸ್/mL ಎಂದು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.
DPPH ಸ್ವತಂತ್ರ ರಾಡಿಕಲ್ಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು DPPH ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮತ್ತು ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ರಸಗಳ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು.31ಹತ್ತು ಮೈಕ್ರೋಲೀಟರ್ ರಸವನ್ನು ಮೆಥನಾಲ್ನಲ್ಲಿ 1 ಮಿಲಿ DPPH ದ್ರಾವಣದೊಂದಿಗೆ (100 μM) ಬೆರೆಸಲಾಯಿತು. 30 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕತ್ತಲೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಂತರ, ಶಿಮಾಡ್ಜು UV ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ (UV-1601 PC) ಬಳಸಿ ಮಿಶ್ರಣದ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು 517 nm ನಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಮಾಪನಾಂಕ ನಿರ್ಣಯ ರೇಖೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಟ್ರೋಲಾಕ್ಸ್ ಸಮಾನ (μM ಟ್ರೋಲಾಕ್ಸ್/ಮಿಲಿ) ಎಂದು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸಲಾಗಿದೆ (R2= 0.990).
ಪಡೆದ ದತ್ತಾಂಶವು NRC 620 ಸಿಂಪಿ ಅಣಬೆಗಳಲ್ಲಿ ಹುದುಗುವಿಕೆಯ 18 ನೇ ದಿನದ ಅಂತ್ಯದ ವೇಳೆಗೆ ಗರಿಷ್ಠ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಉತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ, ಇದು 1302 U/L ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ತಲುಪಿತು. ಇದು ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ಕೃಷಿ ಸಮಯವನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಆಧಾರವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಿತು (ಚಿತ್ರ 1). ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ ಕೃಷಿ ಸಮಯದೊಂದಿಗೆ ಕಿಣ್ವ ಉತ್ಪಾದನೆಯು ಹೆಚ್ಚಾದರೂ, ಹೆಚ್ಚಳದ ದರವು ಕೃಷಿ ಸಮಯಕ್ಕೆ ನೇರವಾಗಿ ಅನುಪಾತದಲ್ಲಿರಲಿಲ್ಲ; 21 ದಿನಗಳ ನಂತರ, ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ಕೇವಲ 90 U/L (1390 U/L ಗೆ) ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಹೆಚ್ಚಿದ ಕೃಷಿ ಸಮಯದ ಆರ್ಥಿಕ ಪ್ರಯೋಜನಗಳೊಂದಿಗೆ ಉತ್ಪನ್ನ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಸಮತೋಲನಗೊಳಿಸಲು 18 ದಿನಗಳನ್ನು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಸೂಕ್ತ ಕೃಷಿ ಸಮಯವಾಗಿ ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು.
ಪ್ಲೆರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್ NRC 620 ರಲ್ಲಿ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಇಳುವರಿಯ ಮೇಲೆ ಕೃಷಿ ಸಮಯದ ಪರಿಣಾಮ. ಮೂರು (12 ಮಿಮೀ) ಶಿಲೀಂಧ್ರ ಕವಕಜಾಲದ ಬ್ಲಾಕ್ಗಳನ್ನು 50 ಮಿಲಿ ಸ್ಟೆರೈಲ್ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದು ಮಾಡಿ ನಂತರ ವಿವಿಧ ಸಮಯಗಳಿಗೆ 28 °C ನಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸಲಾಯಿತು.
ಇತರ ಅಧ್ಯಯನಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ, ಶಿಲೀಂಧ್ರಗಳಿಂದ ಗರಿಷ್ಠ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಸೂಕ್ತವಾದ ಕೃಷಿ ಅವಧಿಯು 7 ರಿಂದ 36 ದಿನಗಳ ನಡುವೆ ಇರುತ್ತದೆ ಎಂದು ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ.32ಎಜೈಕ್ ಮತ್ತು ಇತರರ ಪ್ರಕಾರ.33, *ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ಪಾಲಿಜೋನಾ* WRF03 ಹುದುಗುವಿಕೆಯ ಒಂಬತ್ತನೇ ದಿನದ ಅಂತ್ಯದ ವೇಳೆಗೆ 1637 U/mg ಪ್ರೋಟೀನ್ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಚಟುವಟಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಅತ್ಯಧಿಕ ಪ್ರಮಾಣದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಿತು. ಇದಲ್ಲದೆ, ಓಥ್ಮನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು.34*ಟ್ರೈಕೋಡರ್ಮಾ ಹಾರ್ಜಿಯಾನಮ್* S7113 ಕೃಷಿಯ ಐದನೇ ದಿನದಂದು ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಅನ್ನು ಸ್ರವಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಹಿಡಿದಿದೆ. ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಉತ್ಪಾದನಾ ದರವು ಹದಿನಾಲ್ಕನೇ ದಿನದಂದು ಗರಿಷ್ಠ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ತಲುಪಿತು ಮತ್ತು ನಂತರ ಕ್ರಮೇಣ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು.34ಕಿಣ್ವ ಸ್ರವಿಸುವಿಕೆಯು ಮುಖ್ಯ ಬೆಳವಣಿಗೆಯ ಹಂತದಲ್ಲಿಯೂ ಸಂಭವಿಸಬಹುದಾದರೂ, ಇದು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಮಧ್ಯಂತರ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಗರಿಷ್ಠ ಮಟ್ಟವನ್ನು ತಲುಪುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇಂಗಾಲ ಅಥವಾ ಸಾರಜನಕ ಮೂಲದ ಸೇವನೆಯಿಂದ ಪ್ರಚೋದಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ.34,35
ಪ್ಲೆರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್ NRC 620 ರ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ 50°C ನಿಂದ 80°C ವರೆಗಿನ ವಿಶಾಲ ತಾಪಮಾನದ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿದರೂ, ಗರಿಷ್ಠ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಸಮೀಪದಲ್ಲಿದೆ (69–98%), ಅದರ ಗರಿಷ್ಠ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು 70°C ನಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ (ಚಿತ್ರ 2a). ಈ ತಾಪಮಾನದ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯ ಹೊರಗೆ, ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ಸರಿಸುಮಾರು 70°C ನಲ್ಲಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಕಿಣ್ವವು ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ, ಏಕೆಂದರೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ತಾಪಮಾನವು ಕ್ರಿಯೆಯ ಚಲನ ಶಕ್ತಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ.
*ಪ್ಲ್ಯೂರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* NRC 620 ರಲ್ಲಿ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ತಾಪಮಾನ (a) ಮತ್ತು pH (b) ಯ ಪರಿಣಾಮ. 20 ರಿಂದ 90 °C ವರೆಗಿನ ತಾಪಮಾನವನ್ನು ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ವಿವಿಧ ತಾಪಮಾನಗಳಲ್ಲಿ 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಪೂರ್ವ-ಕಾವು ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಸಾಧಿಸಲಾಯಿತು, ಮೊದಲು ಕಿಣ್ವವನ್ನು ಸೇರಿಸಿ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಲಾಯಿತು. 2.5 ರಿಂದ 7.0 ರ pH ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ 0.1 M ಸಿಟ್ರೇಟ್-ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ ಹೊಂದಿರುವ ದ್ರಾವಣಗಳಲ್ಲಿ ABTS ಅನ್ನು ತಲಾಧಾರವಾಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ pH ನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು.
ಎಜೈಕ್ ಮತ್ತು ಅವರ ಪ್ರಕಾರಆಲ್.33*ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ಪಾಲಿಜೋನಾ* WRF03 ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗೆ ಸೂಕ್ತ ತಾಪಮಾನವು 55 °C ಆಗಿದೆ, ಇದು *ಗ್ಯಾನೋಡರ್ಮಾ ಲುಸಿಡಮ್* ಗೆ ಇರುವಂತೆಯೇ ಇರುತ್ತದೆ.ಲ್ಯಾಕೇಸ್36ಮತ್ತು *ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ಪಾಲಿಜೋನಾ* KU-RNW02737 ಗಾಗಿ ಸೂಕ್ತ ತಾಪಮಾನ (50 °C) ಗೆ ಹೋಲುತ್ತದೆ.ಲ್ಯಾಕೇಸ್ . ಬಾಲ್ಡ್ರಿಯನ್38ಇತರ ಲಿಗ್ನಿನ್-ವಿಘಟನಾ ಕಿಣ್ವ ವ್ಯವಸ್ಥೆಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ, ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ತಾಪಮಾನದ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯು 50 ಮತ್ತು 70 °C ನಡುವೆ ಇರುತ್ತದೆ ಎಂದು ಗಮನಿಸುತ್ತಾರೆ.
ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಕಿಣ್ವವು pH 3.0 ನಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಧಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿತು, pH 3.5 ನಲ್ಲಿ 94% ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ತಲುಪಿತು ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಇದು 2.5 ರಿಂದ 7.0 ವರೆಗಿನ ವಿಶಾಲ pH ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಸಕ್ರಿಯವಾಗಿ ಉಳಿಯಿತು (ಚಿತ್ರ 2b). ಇದಲ್ಲದೆ, ಇದು ತಟಸ್ಥ ಅಥವಾ ಕ್ಷಾರೀಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಆಮ್ಲೀಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿತು. ಇದರ ಚಟುವಟಿಕೆಯು 2.5 ರಿಂದ 4.5 ರವರೆಗಿನ pH ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಕನಿಷ್ಠ 77% ರಷ್ಟಿತ್ತು, ಆದರೆ pH 7.0 ನಲ್ಲಿ ಕೇವಲ ಸರಿಸುಮಾರು 38% ತಲುಪಿತು. *Trametes polyzona* WRF03 ನಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ pH 4.533 ಆಗಿತ್ತು, ಇದು *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, ಮತ್ತು *Trametes hirsuta* 41 ನಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳಿಗೆ pH ನಂತೆಯೇ ಇರುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಚೈರಿನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ನಡೆಸಿದ ಅಧ್ಯಯನದ ಪ್ರಕಾರ.42, *ಪಾಲಿಮಾರ್ಫಾ f. sp.* WR710-1 ರಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ pH 2.2 ಆಗಿದ್ದರೆ, *ಪಾಲಿಮಾರ್ಫಾ f. sp.* IBL-04 ರಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ pH 5.043 ಆಗಿದೆ. T2/T3 ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ತಾಮ್ರ ಪರಮಾಣುಗಳಿಗೆ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್ ಅಯಾನುಗಳ (ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಇನ್ಹಿಬಿಟರ್) ಬಂಧನವು ತಟಸ್ಥ ಅಥವಾ ಕ್ಷಾರೀಯ pH ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗಲು ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು. ಇದು T1 ಕೇಂದ್ರದಿಂದ T2/T3 ಕೇಂದ್ರಕ್ಕೆ ಆಂತರಿಕ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ವರ್ಗಾವಣೆಯನ್ನು ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸಬಹುದು, ಇದರಿಂದಾಗಿಸೀಮಿತಗೊಳಿಸುವುದುಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆ23,44
ಕಿಣ್ವವನ್ನು ವಿಭಿನ್ನ ತಾಪಮಾನಗಳಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡುವ ಮೂಲಕ, ಕಾವುಕೊಡುವ ಸಮಯ ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನ ಎರಡೂ ಕಿಣ್ವದ ಸ್ಥಿರತೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ ಎಂದು ಕಂಡುಬಂದಿದೆ. ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ, *ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ಪಾಲಿಜೋನಾ* NRC 620 ರ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ 40℃ ಮತ್ತು 50℃ ನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿತು, 120 ನಿಮಿಷಗಳ ನಂತರ ಕ್ರಮವಾಗಿ 68.33% ಮತ್ತು 59.61% ಆರಂಭಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಂಡಿತು (ಚಿತ್ರ 3a). ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಅದೇ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (40℃ ಮತ್ತು 50℃, 120 ನಿಮಿಷಗಳು), *ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ಪಾಲಿಜೋನಾ* WRF03 ರ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಕ್ರಮವಾಗಿ 64.38% ಮತ್ತು 42.92% ತನ್ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ.33ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಕಾವುಕೊಡುವ ಸಮಯ ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿನ ಹೆಚ್ಚಳವು *ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ಪಾಲಿಜೋನಾ* NRC 620 ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು; 60 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 60°C ಮತ್ತು 70°C ನಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಟ್ಟ ನಂತರ, ಅದರ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ಕ್ರಮವಾಗಿ 39.24% ಮತ್ತು 1.72% ಕ್ಕೆ ಇಳಿಯಿತು (ಚಿತ್ರ 3a). ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಫಲಿತಾಂಶಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ, *ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ಪಾಲಿಜೋನಾ* WRF03 ನಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಉಷ್ಣ ಸಂಸ್ಕರಣಾ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಉದ್ದಕ್ಕೂ 40 ಮತ್ತು 50°C ನಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ.33ಅದೇ ರೀತಿ, ಲುವಾಂಗ್ಜಾರೋಯೆಂಕಿಟ್ ಮತ್ತು ಇತರರುಆಲ್.37ಮತ್ತು ಚೈರಿನ್ ಮತ್ತು ಇತರರುಆಲ್.4250 °C ನಲ್ಲಿ 1 ಗಂಟೆಯ ಕಾಲ ಕ್ರಮವಾಗಿ ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ಪಾಲಿಜೋನಾ KURNW027 ಮತ್ತು ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ಪಾಲಿಜೋನಾ WR710-1 ನಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ವರದಿ ಮಾಡಿದೆ. ವಿವಿಧ ಜೈವಿಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳಲ್ಲಿ ಅನ್ವಯವಾಗುವ ಉಪಯುಕ್ತ ಜೈವಿಕ ವೇಗವರ್ಧಕವಾಗಿ, ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ವಿಶಾಲ ತಾಪಮಾನ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಉತ್ತಮ ಸ್ಥಿರತೆ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಯಕ್ಷಮತೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿರಬೇಕು.
*ಪ್ಲ್ಯೂರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* NRC 620 ರಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ಥರ್ಮೋಸ್ಟಾಟಿಕ್ ಸ್ಥಿರತೆ (a) ಮತ್ತು pH ಸ್ಥಿರತೆ (b). 0.05 M ಸೋಡಿಯಂ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ (pH 7.0) ನಲ್ಲಿ 40, 50, 60 ಮತ್ತು 70 °C ನಲ್ಲಿ ಕ್ರಮವಾಗಿ 2 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಿಣ್ವ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಕಾವುಕೊಡುವ ಮೂಲಕ ಥರ್ಮೋಸ್ಟಾಟಿಕ್ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು. 0.1 M ಸಿಟ್ರೇಟ್ ಬಫರ್ ಮತ್ತು ಟ್ರಿಸ್ ಬಫರ್ (pH 3, 4, 6 ಮತ್ತು 7) ನಲ್ಲಿ 40 °C ನಲ್ಲಿ 2 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಿಣ್ವ ದ್ರಾವಣವನ್ನು ಕಾವುಕೊಡುವ ಮೂಲಕ pH ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ಣಯಿಸಲಾಯಿತು. ಕಾವುಕೊಡುವಿಕೆಯ ನಂತರ ABTS ಅನ್ನು ತಲಾಧಾರವಾಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಉಳಿದ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು.
ಕಿಣ್ವದ ಬಳಕೆ ಮತ್ತು ಶೇಖರಣೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು, ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಸ್ಥಿರತೆಯ ಮೇಲೆ pH ನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ನಾವು ತನಿಖೆ ಮಾಡಿದ್ದೇವೆ. ವಿಭಿನ್ನ pH ಮೌಲ್ಯಗಳಿಗೆ ಒಡ್ಡಿಕೊಳ್ಳುವುದರಿಂದ ಪ್ರೋಟೀನ್ ರಚನೆಯ ಸ್ಥಿರತೆಯ ಮೇಲೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಕಿಣ್ವ ಅಣುವಿನ ಸ್ಥಿರತೆ ಮತ್ತು ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಪ್ರಭಾವ ಬೀರುತ್ತದೆ. ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಆಮ್ಲೀಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಕಿಣ್ವವು ಕಡಿಮೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ, ಆದರೆ ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ pH ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ (ತಟಸ್ಥ ಮತ್ತು ಕ್ಷಾರೀಯ ಪ್ರದೇಶಗಳು) ಉತ್ತಮ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿತು. 7.0, 6.0, 4.0, ಮತ್ತು 3.0 ರ pH ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ, 120 ನಿಮಿಷಗಳ ನಂತರ ಕಿಣ್ವ ಧಾರಣ ದರಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಸರಿಸುಮಾರು 100%, 62.54%, 52.39% ಮತ್ತು 11.14% ಆಗಿದ್ದವು (ಚಿತ್ರ 3b). *ಸ್ಟ್ರೋಂಬಸ್ ಮಲ್ಟಿಸಸ್* WRF03 ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ತಟಸ್ಥ pH ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ (5.5–6.5) ಹೆಚ್ಚಿನ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಮತ್ತು ಆಮ್ಲೀಯ pH ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ (4.0 ಕ್ಕಿಂತ ಕಡಿಮೆ) ಕಡಿಮೆ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ. 5.5, 6.0 ಮತ್ತು 6.5 ರ pH ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ 120 ನಿಮಿಷಗಳ ನಂತರ, ಕಿಣ್ವ ಧಾರಣ ದರಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಸರಿಸುಮಾರು 82%, 100% ಮತ್ತು 93% ಆಗಿದ್ದವು.33ಖೈರಿನ್ ಮತ್ತು ಇತರರು.42ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ಪಾಲಿಜೋನಾ WR710-1 ರ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ 6.0 ರಿಂದ 7.0 ರ pH ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸಯೀದ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ಗಮನಿಸಿದರು.45ತಟಸ್ಥ pH ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಹೆಚ್ಚು ಸ್ಥಿರವಾಗಿರುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಸೆರೆನಾ ಯುನಿಕಲರ್ನ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಕ್ಷಾರೀಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (pH 9.0) ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿತು.46ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳು ವಿಶಾಲವಾದ pH ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ. ಇದು ಕೈಗಾರಿಕಾ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳಿಗೆ ಪ್ರಮುಖ ಲಕ್ಷಣವಾಗಿರಬಹುದು.
ಕೆಲವು ಲೋಹದ ಅಯಾನುಗಳು ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಉತ್ತೇಜಕ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಬಂಧಕ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದರಿಂದ, ಕೈಗಾರಿಕಾ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಅವುಗಳ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಪರಿಗಣಿಸಬೇಕು. ಲೋಹದ ಅಯಾನುಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯ ಪರಿಸರ ಮಾಲಿನ್ಯಕಾರಕಗಳಾಗಿದ್ದು, ಅವು ಬಾಹ್ಯಕೋಶೀಯ ಕಿಣ್ವಗಳ ಸ್ಥಿರತೆ ಮತ್ತು ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಮೇಲೆ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತವೆ.47*ಪ್ಲುರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* NRC 620 ರಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಮೇಲೆ ಬಹು ಲೋಹದ ಅಯಾನುಗಳ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಲು, ನಾವು ಅನುಗುಣವಾದ ಪ್ರಯೋಗಗಳನ್ನು ನಡೆಸಿದ್ದೇವೆ. ಚಿತ್ರ 4 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಿರುವಂತೆ, ಬಳಸಿದ ಲೋಹದ ಪ್ರಕಾರವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ, ಲೋಹದ ಅಯಾನು ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು 2.5 mM ನಿಂದ 10 mM ಗೆ ಹೆಚ್ಚಿಸುವುದು ಕಿಣ್ವ ಕಾರ್ಯದ ಮೇಲೆ ನಕಾರಾತ್ಮಕ ಪರಿಣಾಮ ಬೀರುತ್ತದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗೆ,ಮಿಗ್ರಾಂ⁺ , ಕೋ²⁺ , ಝ್ನ್²⁺, ಮತ್ತುಕ್ಯೂ²⁺ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಉತ್ತೇಜಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸಬಹುದು, ಆದರೆನಾ⁺ , ಮಿಲಿಯನ್²⁺ , CA²⁺, ಮತ್ತುಕೆ⁺ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಬಹುದು. 10 mM ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ, Cu²⁺ ಮತ್ತು Mg²⁺ ಅಯಾನುಗಳು *ಪ್ಲುರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* NRC 620 ರಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಅತ್ಯಂತ ಪ್ರಬಲವಾದ ಸಕ್ರಿಯಕಾರಕಗಳಾಗಿದ್ದು, ಕ್ರಮವಾಗಿ ಸರಿಸುಮಾರು 34% ಮತ್ತು 20% ನಷ್ಟು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಒದಗಿಸುತ್ತವೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, 10 mM ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ, Ca²⁺ ಅಯಾನುಗಳು ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ಅತ್ಯಂತ ಪ್ರಬಲವಾದ ಪ್ರತಿಬಂಧಕವಾಗಿದ್ದು, ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಸರಿಸುಮಾರು 60% ರಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.
ಪ್ಲೆರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್ NRC 620 ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಲೋಹದ ಅಯಾನುಗಳ ಪರಿಣಾಮ. ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಅನ್ನು 2.5 mM ಮತ್ತು 10 mM ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ಲೋಹದ ಅಯಾನುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಸೋಡಿಯಂ ಫಾಸ್ಫೇಟ್ ಬಫರ್ನಲ್ಲಿ (0.05 M, pH 7.0) 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಡಲಾಯಿತು. ನಂತರ ತಲಾಧಾರವನ್ನು (ABTS) ಸೇರಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಲಾಯಿತು, ನಂತರ ಸಾಪೇಕ್ಷ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಅಳೆಯಲಾಯಿತು.
ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು Mg²⁺ ಮತ್ತು Cu²⁺ *ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ಪಾಲಿಜೋನಾ* WRF03³ ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ಕಂಡುಕೊಂಡ ಇತರ ಲೇಖಕರ ಫಲಿತಾಂಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿವೆ. ಕ್ಯಾಸ್ಟಾನೊ ಮತ್ತು ಇತರರು⁴⁸ *ಕ್ಸೈಲೇರಿಯಾ* sp. ನಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಅನ್ನು ತಾಮ್ರ ಅಯಾನುಗಳಿಂದ (Cu²⁺) ಸ್ವಲ್ಪ ಮಟ್ಟಿಗೆ ಉತ್ತೇಜಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಕಂಡುಹಿಡಿದರು. ಇದಲ್ಲದೆ, ಫೊರೌಟನ್ಫಾರ್ ಮತ್ತು ಇತರರು⁴⁹ ಮತ್ತು Si ಮತ್ತು ಇತರರು⁵⁰ ಕ್ರಮವಾಗಿ *ಪ್ಯಾರಕೋನಿಯೊಥೈರಿಯಮ್ ವೇರಿಯೇಬಲ್* ಮತ್ತು *ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ಪ್ಯೂಬೆಸೆನ್ಸ್* ನಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳ ಮೇಲೆ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಅಧ್ಯಯನಗಳನ್ನು ನಡೆಸಿದರು. ಈ ಕಿಣ್ವದ ಟೈಪ್ II ತಾಮ್ರ-ಬಂಧಿಸುವ ತಾಣ (T2) ಅನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸಾಂದ್ರತೆಯಲ್ಲಿ Cu²⁺ ನೊಂದಿಗೆ ಸ್ಯಾಚುರೇಟೆಡ್ ಮಾಡಬಹುದು, ಇದು ಹೆಚ್ಚಿನ Cu²⁺³⁹ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳಲ್ಲಿ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಪ್ರಚೋದನೆಯನ್ನು ವಿವರಿಸಬಹುದು. ಬಿಳಿ ಕೊಳೆತ ಶಿಲೀಂಧ್ರ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳು ಬಹು ತಾಮ್ರ ಪರಮಾಣುಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಆಕ್ಸಿಡೇಸ್ಗಳಾಗಿರುವುದರಿಂದ, ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ತಾಮ್ರ ಅಯಾನುಗಳ ಪರಿಣಾಮಗಳು ವೈವಿಧ್ಯಮಯವಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ಉತ್ತೇಜಕ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಬಂಧಕದಿಂದ ತಟಸ್ಥದವರೆಗೆ ಇರುತ್ತವೆ.⁵¹ ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಝೌ ಮತ್ತು ಇತರರು. [52]ಎಂದು ವರದಿ ಮಾಡಿದೆಕ್ಯೂ²⁺ತೈವಾನ್ ಭೂಗತ ಗೆದ್ದಲಿನ (ಒಡೊಂಟೊಟರ್ಮ್ಸ್ ಫಾರ್ಮೋಸಾನಸ್) ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸಿತು. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಸೆರೆನಾ ಜಾತಿಯ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳು. HYB07[53]ಮತ್ತು ಕ್ಲಿಟೋಸೈಬ್ ಮ್ಯಾಕ್ಸಿಮಾ[54]ತಾಮ್ರ ಅಯಾನುಗಳಿಂದ ಪ್ರಭಾವಿತವಾಗಿರಲಿಲ್ಲ.
ತಲಾಧಾರದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಅದರ ಚಲನ ನಿಯತಾಂಕಗಳಿಂದ (Km ಮತ್ತು Vmax) ಪ್ರತಿನಿಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ; ಕಿಣ್ವಕ್ಕೆ ತಲಾಧಾರದ ಬಂಧಕ ಸಂಬಂಧವು ಬಲವಾಗಿದ್ದಷ್ಟೂ, Km ಮೌಲ್ಯವು ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ತಲಾಧಾರದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯು ಹೆಚ್ಚಾಗುತ್ತದೆ.3,21,55*ಪ್ಲುರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* NRC 620 ರಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ಚಲನ ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು (Km ಮತ್ತು Vmax) ಗ್ರಾಫ್ಪ್ಯಾಡ್ ಪ್ರಿಸ್ಮ್ 6.0 ಸಾಫ್ಟ್ವೇರ್ ಬಳಸಿ ಲೈನ್ವೀವರ್-ಬರ್ಕ್ ಪ್ಲಾಟ್ ಅನ್ನು ಪ್ಲಾಟ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಯಿತು (ಚಿತ್ರ 5). ABTS ಅನ್ನು ತಲಾಧಾರವಾಗಿ ಬಳಸುವಾಗ, ಫಲಿತಾಂಶಗಳು 1.99 mM ಮತ್ತು 16217 μmol ಆಗಿದ್ದವು.ನಿಮಿಷ⁻¹ ಎಲ್⁻¹,ಕ್ರಮವಾಗಿ. ಎಲ್ಸಾಯದ್ ಮತ್ತು ಇತರರು.21ABTS ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣಕ್ಕೆ Km ಮೌಲ್ಯಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ 0.1 mM ಮತ್ತು 0.064 mM ಎಂದು ವರದಿ ಮಾಡಿದೆ, ಇದು ABTS ಗಾಗಿ Lac A ಮತ್ತು Lac B ಐಸೊಎಂಜೈಮ್ಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, Vmax ಮೌಲ್ಯಗಳು 0.182 μmol ಆಗಿದ್ದವು.ನಿಮಿಷ⁻¹ಮತ್ತು 0.603 μmolನಿಮಿಷ⁻¹ಕ್ರಮವಾಗಿ. ಪಡೆದ Km ಮೌಲ್ಯವು Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM) ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಿತ್ತು; ಇದಲ್ಲದೆ, ಅವುಗಳ Vmax ಮೌಲ್ಯ (1429 mmol min⁻¹) ಕೂಡ ಆಗಿತ್ತುಕೆಳಮಟ್ಟದABTS ಅನ್ನು ತಲಾಧಾರವಾಗಿ ಬಳಸುವಾಗ.33 ಅದೇ ರೀತಿ, ಲೆಂಟಿನಸ್ ಸ್ಕ್ವಾರೋಸುಲಸ್ MR13 ಮತ್ತು ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ sp. AH28-2 ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳ Km ಮೌಲ್ಯಗಳು ಕ್ರಮವಾಗಿ 0.0714 mM ಮತ್ತು 0.025 mM ಆಗಿದ್ದವು, ಮತ್ತು Vmax ಮೌಲ್ಯಗಳು 0.0091 mM min−1 ಮತ್ತು 0.67 mM min−1 mg−1 (ABTS ಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ) ಆಗಿದ್ದವು., ಕ್ರಮವಾಗಿ.56,57
*ಪ್ಲ್ಯೂರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* NRC 620 ರಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ABTS ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು, ಮತ್ತು ಆರಂಭಿಕ ಕ್ರಿಯೆಯ ವೇಗ ಮತ್ತು ABTS ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧದ ಲೈನ್ವೀವರ್-ಬರ್ಕ್ ನಕ್ಷೆಯನ್ನು ರೂಪಿಸಲಾಯಿತು. ಚಲನಶೀಲ ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು (Vmax ಮತ್ತು Km) ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ವಿಭಿನ್ನ ಸಾಂದ್ರತೆಗಳೊಂದಿಗೆ (0.025–3.0 mM) ABTS ನ ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣ ಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು pH 4.5 ನಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಯಿತು. ಮೈಕೆಲಿಸ್-ಮೆಂಟೆನ್ ಚಲನ ಸ್ಥಿರಾಂಕಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ವೇಗ ಮತ್ತು ತಲಾಧಾರ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಪರಸ್ಪರ ಸಂಬಂಧದ ಲೈನ್ವೀವರ್-ಬರ್ಕ್ ನಕ್ಷೆಯನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು. ಗ್ರಾಫ್ಪ್ಯಾಡ್ ಪ್ರಿಸಂ 6.01 ಸಾಫ್ಟ್ವೇರ್ ಬಳಸಿ ಲೈನ್ವೀವರ್-ಬರ್ಕ್ ನಕ್ಷೆಯಿಂದ ಚಲನ ಸ್ಥಿರಾಂಕಗಳನ್ನು ಲೆಕ್ಕಹಾಕಲಾಯಿತು.
ಪೆಕ್ಟಿನೇಸ್ಗಳಂತಹ ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣ ಕಿಣ್ವಗಳು, ಪೆಕ್ಟಿಕ್ ಪದಾರ್ಥಗಳನ್ನು ಜಲವಿಚ್ಛೇದನಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ, ಸ್ನಿಗ್ಧತೆ ಮತ್ತು ಟರ್ಬಿಡಿಟಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತವೆ. ಅವು ರಚನಾತ್ಮಕ ಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ಗಳನ್ನು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಒಡೆಯುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಇಳುವರಿ ಮತ್ತು ಸ್ಪಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸಲು ಸೆಲ್ಯುಲೇಸ್ಗಳು ಮತ್ತು ಹೆಮಿಸೆಲ್ಯುಲೇಸ್ಗಳಂತಹ ಇತರ ಕಿಣ್ವಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜನೆಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಪೆಕ್ಟಿನೇಸ್ಗಳು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಫರ್ಬಿಡಿಟಿ ಮತ್ತು ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಬ್ರೌನಿಂಗ್ಗೆ ಪ್ರಮುಖ ಕಾರಣವಾಗುವ ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸುವುದಿಲ್ಲ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಸೇಬು ಮತ್ತು ದ್ರಾಕ್ಷಿ ರಸದಂತಹ ರಸಗಳಲ್ಲಿ.58ಇದಕ್ಕೆ ವ್ಯತಿರಿಕ್ತವಾಗಿ, ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳು ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣವನ್ನು ವೇಗವರ್ಧಿಸಿ, ಅವುಗಳನ್ನು ದೊಡ್ಡದಾದ, ಕರಗದ ಅಣುಗಳಾಗಿ ಪಾಲಿಮರೀಕರಿಸುತ್ತವೆ, ಇವುಗಳನ್ನು ಸೆಡಿಮೆಂಟೇಶನ್ ಅಥವಾ ಶೋಧನೆಯಿಂದ ತೆಗೆದುಹಾಕಬಹುದು. ಈ ಕಾರ್ಯವಿಧಾನವು ಸ್ಪಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುವುದಲ್ಲದೆ, ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಬ್ರೌನಿಂಗ್ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ರಸದ ಶೆಲ್ಫ್ ಜೀವಿತಾವಧಿಯನ್ನು ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಆಧಾರಿತ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಸೌಮ್ಯ ಸಂಸ್ಕರಣಾ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ (pH 3.5–5.5, ತಾಪಮಾನ 25–40 °C) ಕೈಗೊಳ್ಳಬಹುದು, ಇದು ಅವುಗಳ ಪೌಷ್ಟಿಕಾಂಶ ಅಥವಾ ಆರ್ಗನೊಲೆಪ್ಟಿಕ್ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳಿಗೆ ಧಕ್ಕೆಯಾಗದಂತೆ ಸೂಕ್ಷ್ಮ ರಸಗಳಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾಗಿಸುತ್ತದೆ.59ಪೆಕ್ಟಿನೇಸ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು 1-2 ಗಂಟೆಗಳಲ್ಲಿ ರಸವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅಧ್ಯಯನಗಳು ತೋರಿಸಿವೆ, ಆದರೆ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಲು ದೀರ್ಘ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ಸಮಯವನ್ನು (3-6 ಗಂಟೆಗಳು) ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಕಿಣ್ವವನ್ನು ನಿಶ್ಚಲಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅಥವಾ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಅನ್ನು ಯಾಂತ್ರಿಕ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣ ವಿಧಾನಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸುವ ಮೂಲಕ ಈ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯನ್ನು ಅತ್ಯುತ್ತಮವಾಗಿಸಬಹುದು.60ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಕಚ್ಚಾ ಸಾರದ ಕಿಣ್ವ ಪ್ರೊಫೈಲಿಂಗ್ ಗಮನಾರ್ಹವಾದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಮತ್ತು α-ಅಮೈಲೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳನ್ನು ಬಹಿರಂಗಪಡಿಸಿತು, ಆದರೆ ಪೆಕ್ಟಿನೇಸ್ ಮತ್ತು ಕ್ಸೈಲಾನೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆಗಳು ತೀರಾ ಕಡಿಮೆ ಇದ್ದವು ಮತ್ತು ಸೆಲ್ಯುಲೇಸ್ ಚಟುವಟಿಕೆ ಪತ್ತೆಯಾಗಲಿಲ್ಲ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಟರ್ಬಿಡಿಟಿ ಮತ್ತು ಫೀನಾಲಿಕ್ ಅಂಶದಲ್ಲಿನ ಕಡಿತವು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ಕ್ರಿಯೆಯಿಂದಾಗಿ, ಆದರೆ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯ ಬದಲಾವಣೆಯು ಭಾಗಶಃ ಅಮೈಲೇಸ್ನ ಕ್ರಿಯೆಯಿಂದಾಗಿರಬಹುದು.
ಹೊಸದಾಗಿ ಹಿಂಡಿದ ಸೇಬಿನ ರಸ ಮತ್ತು ಲ್ಯಾಕೇಸ್-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳ ಭೌತ-ರಾಸಾಯನಿಕ ನಿಯತಾಂಕಗಳನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 1 ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಹೊಸದಾಗಿ ಹಿಂಡಿದ ಸೇಬಿನ ರಸದ (71.59%) ಇಳುವರಿಯು ಲ್ಯಾಕೇಸ್-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳಿಗಿಂತ (87.34%) ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಪಿಲ್ನಿಕ್ ಮತ್ತು ಆರೆಂಜ್ನ ಸಂಶೋಧನೆಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿವೆ.61, ಹಣ್ಣಿನ ಸಂಸ್ಕರಣೆಯಲ್ಲಿ ಕಿಣ್ವಗಳ ಬಳಕೆಯು ರಸದ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ, ಶೋಧನೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸಾಂದ್ರತೆಗಾಗಿ ಉತ್ತಮ-ಗುಣಮಟ್ಟದ, ಸ್ಪಷ್ಟ ರಸವನ್ನು ಪಡೆಯಬಹುದು ಎಂದು ಯಾರು ಸೂಚಿಸಿದರು. ರಸದ ಇಳುವರಿಯಲ್ಲಿನ ಹೆಚ್ಚಳವು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ರಸದಲ್ಲಿ ಕರಗುವ ಸಕ್ಕರೆಗಳ ಅಂಶದಲ್ಲಿನ ಹೆಚ್ಚಳದಿಂದಾಗಿ. ಹಣ್ಣುಗಳ ಕಿಣ್ವಕ ಜಲವಿಚ್ಛೇದನದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಉತ್ಪನ್ನದ ಜೀವಕೋಶ ಗೋಡೆಗಳಲ್ಲಿ ಮೆಸೊಗ್ಲಿಯಾ ಮತ್ತು ಪೆಕ್ಟಿನ್ ನಾಶವಾಗುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ತಟಸ್ಥ ಸಕ್ಕರೆಗಳು ಮತ್ತು ಆಮ್ಲಗಳಂತಹ ಕರಗುವ ಪದಾರ್ಥಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತನೆಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ.62. ೬೨.ಕಿಣ್ವ-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಸೇಬಿನ ರಸದ pH ಮೌಲ್ಯವು ನಿಯಂತ್ರಣ ಗುಂಪಿನ (P < 0.05) ಗಿಂತ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಎರಡೂ ಗುಂಪುಗಳ pH ಮೌಲ್ಯವು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ (ಕೋಷ್ಟಕ 1). ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಮಾರ್ಕ್ ಮತ್ತು ಇತರರ ಫಲಿತಾಂಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿವೆ.63, ಶಾಖ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ ಶೇಖರಣೆಯ ನಂತರ ಗೋಡಂಬಿ ಹಣ್ಣಿನ ರಸದ pH ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ಅವರು ಗಮನಿಸಿದರು. ಕಿಣ್ವ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ ಪೆಕ್ಟಿನ್ ಅವನತಿ ಮತ್ತು ಗ್ಯಾಲಕ್ಟುರೋನಿಕ್ ಆಮ್ಲ ರಚನೆಯು ಶೇಖರಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ pH ಹೆಚ್ಚಳಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು. ಕಿಣ್ವ-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳ pH ಶೇಖರಣೆಯ ಉದ್ದಕ್ಕೂ 4.05 ಮತ್ತು 4.31 ರ ನಡುವೆ ಉಳಿಯಿತು, ಆದರೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ಸೇಬಿನ ರಸದ pH 4.12 ಮತ್ತು 4.33 ರ ನಡುವೆ ಇತ್ತು.
ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ಮತ್ತು ಲ್ಯಾಕೇಸ್-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳ ಒಟ್ಟು ಆಮ್ಲೀಯತೆ (TA) ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯ ಹೆಚ್ಚಾದಂತೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗುವ ಪ್ರವೃತ್ತಿಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ (ಕೋಷ್ಟಕ 1). ಆಮ್ಲೀಯತೆಯ ಇಳಿಕೆಗೆ ಸಾವಯವ ಆಮ್ಲಗಳು ಕಾರ್ಬೋಹೈಡ್ರೇಟ್ಗಳಾಗಿ ಅಥವಾ ಕಿಣ್ವಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತನೆಗೊಳ್ಳುವುದು ಹಾಗೂ ರಸ ಸಂಗ್ರಹಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಆಕ್ಸಿಡೀಕರಣ ಕಾರಣ ಎಂದು ಹೇಳಲಾಗಿದೆ.64ನಿಯಂತ್ರಣ ಸೇಬು ರಸ ಮತ್ತು ಕಿಣ್ವ-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮಾದರಿಗಳ ಒಟ್ಟು ಆಮ್ಲೀಯತೆಯು ಇತರ ರಸಗಳಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ (ಸ್ಟ್ರಾಬೆರಿ ರಸ 0.9%, ಪ್ಲಮ್ ರಸ 2.2%, ಕುಮ್ಕ್ವಾಟ್ ರಸ 1.0%, ಏಪ್ರಿಕಾಟ್ ರಸ 2.4%, ಕಿತ್ತಳೆ ರಸ 0.8%), ಆದರೆ ಇತರ ರಸಗಳಿಗಿಂತ (ಉದಾ, ಪೇರಳೆ ರಸ 0.3%) ಹೋಲುತ್ತದೆ.62ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ಹೊಸದಾಗಿ ಹಿಂಡಿದ ಸೇಬಿನ ರಸದಲ್ಲಿನ ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳು ಬೆಳೆಯುತ್ತಿರುವ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು, ಆನುವಂಶಿಕ ಅಂಶಗಳು, ಪರಿಪಕ್ವತೆಯ ಮಟ್ಟ ಮತ್ತು ಸಂಸ್ಕರಣಾ ವಿಧಾನಗಳಂತಹ ವಿವಿಧ ಅಂಶಗಳಿಂದಾಗಿರಬಹುದು.65ಸಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಿದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳೊಂದಿಗೆ ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಲ್ಯಾಕೇಸ್-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಒಟ್ಟು ಆಮ್ಲೀಯತೆಯ ಇಳಿಕೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿದೆ.6674 ದಿನಗಳ ಶೇಖರಣೆಯ ನಂತರ ಜಿನ್ ನುವೊ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಒಟ್ಟು ಆಮ್ಲೀಯತೆಯ ಇಳಿಕೆಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದಂತೆ. ಮತ್ತೊಂದೆಡೆ, ಓಶ್ಮಿಯಾನ್ಸ್ಕಿ ಮತ್ತು ವೋಜ್ಡಿಲೊ67ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣ ವಿಧಾನಗಳ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡುವಾಗ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಆಮ್ಲೀಯತೆಯಲ್ಲಿ ಯಾವುದೇ ಗಮನಾರ್ಹ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ಕಂಡುಬಂದಿಲ್ಲ.
ಕೋಷ್ಟಕ 1 ರಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಲ್ಯಾಕೇಸ್-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಮಾಡಿದ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಒಟ್ಟು ಕರಗುವ ಘನವಸ್ತುಗಳ (TSS) ಮೌಲ್ಯವು ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ಮಾದರಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ ಎಂದು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಪ್ರಕಟಿತ ಅಧ್ಯಯನಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿವೆ.. 68ಇದಲ್ಲದೆ, ಕೋಷ್ಟಕ 1 ರಲ್ಲಿ ನಿಯಂತ್ರಣ ಆಪಲ್ ಜ್ಯೂಸ್ ಗುಂಪಿನ TSS ಮೌಲ್ಯವು ಆರಂಭಿಕ ಸಮಯದಲ್ಲಿ 9.58 ರಷ್ಟಿತ್ತು ಮತ್ತು ಶೇಖರಣಾ ಅವಧಿಯ ಅಂತ್ಯದ ವೇಳೆಗೆ 11.05 ಕ್ಕೆ ತಲುಪಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಮೌಲ್ಯಗಳು ಹಮೀದ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ವರದಿ ಮಾಡಿದ ತಾಜಾ ಆಪಲ್ ಜ್ಯೂಸ್ನ TSS ಮೌಲ್ಯಗಳಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ.69. 69.(ಕ್ರಮವಾಗಿ 11.2 ಮತ್ತು 11.80). ಲ್ಯಾಕೇಸ್-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಮಾದರಿಗಳ TSS ಮೌಲ್ಯವು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು, 11.23 ರಿಂದ ಪ್ರಾರಂಭವಾಗಿ 4°C ನಲ್ಲಿ ಎರಡು ವಾರಗಳ ಸಂಗ್ರಹಣೆಯ ನಂತರ 12.93 ತಲುಪಿತು (ಕೋಷ್ಟಕ 1). ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯದಲ್ಲಿ TSS ನಲ್ಲಿ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಹೆಚ್ಚಳವು ಸಿಟ್ರಸ್ ಹಣ್ಣುಗಳು, ನಿಂಬೆಹಣ್ಣುಗಳು ಮತ್ತು ಸಿಹಿ ಕಿತ್ತಳೆಗಳಲ್ಲಿಯೂ ಕಂಡುಬಂದಿದೆ. ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಕರಗುವ ಘನವಸ್ತುಗಳ (TSS) ಹೆಚ್ಚಳವು ಪಾಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ಗಳು (ಪಿಷ್ಟ) ಜಲವಿಚ್ಛೇದನೆಯಿಂದ ಮೊನೊಸ್ಯಾಕರೈಡ್ಗಳಿಗೆ (ಸಕ್ಕರೆ), ರಸ ನಿರ್ಜಲೀಕರಣದಿಂದಾಗಿ ಸಾಂದ್ರತೆಯ ಹೆಚ್ಚಳ ಮತ್ತು ರಸದಲ್ಲಿ ಪೆಕ್ಟಿನ್ ಕರಗುವ ಘನವಸ್ತುಗಳಾಗಿ ಅವನತಿ ಹೊಂದುವುದರಿಂದಾಗಿರಬಹುದು. ಒಟ್ಟು ಕರಗುವ ಘನವಸ್ತುಗಳ (TSS) ಹೆಚ್ಚಳವು ಕರಗುವ ಸಕ್ಕರೆಗಳ ಹೆಚ್ಚಳದಿಂದಾಗಿರಬಹುದು, ಇದು ಪೆಕ್ಟಿನ್ ಅಥವಾ ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಅನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಪೆಕ್ಟಿನ್ ಅಥವಾ ಸೆಲ್ಯುಲೇಸ್ನಿಂದ ಕರಗುವ ಸಕ್ಕರೆಗಳಾಗಿ ಪರಿವರ್ತಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅಥವಾ ಪಿಷ್ಟವನ್ನು ಸಕ್ಕರೆಗಳಾಗಿ ಜಲವಿಚ್ಛೇದನೆಯಿಂದ ರೂಪುಗೊಳ್ಳಬಹುದು ಎಂದು ಹ್ಯಾಮೆಡ್ ಮತ್ತು ಇತರರು ವರದಿ ಮಾಡಿದ್ದಾರೆ.69.ಲ್ಯಾಕೇಸ್-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಸೇಬಿನ ರಸವು ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ರಸಕ್ಕಿಂತ ಉತ್ತಮ ಹರಿವು ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುವುದರಿಂದ, ಸೇಬಿನ ರಸದ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳ ಮೇಲೆ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ದೃಷ್ಟಿಗೋಚರವಾಗಿ ಗಮನಿಸಬಹುದು. ಈ ಅವಲೋಕನವನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 1 ರಲ್ಲಿ ದಾಖಲಿಸಲಾಗಿದೆ; ಕಿಣ್ವ-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಮಾದರಿಯ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆ 1.87 cP ಆಗಿದ್ದರೆ, ನಿಯಂತ್ರಣ ಮಾದರಿಯ ಸ್ನಿಗ್ಧತೆ 2.95 cP ಆಗಿತ್ತು. ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯಲ್ಲಿ ಈ ಗಮನಾರ್ಹ ಇಳಿಕೆ ಪೆಕ್ಟಿನ್ ತರಹದ ವಸ್ತುಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ನೀರು-ಹಿಡಿತ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಮತ್ತು ಒಗ್ಗಟ್ಟಿನ ಜಾಲ ರಚನೆಯ ರಚನೆಯಿಂದಾಗಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ.
ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, ಸ್ಪೆಕ್ಟ್ರೋಫೋಟೋಮೀಟರ್ ಬಳಸಿ 420 nm ನಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆಯನ್ನು ಅಳೆಯುವ ಮೂಲಕ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಬ್ರೌನಿಂಗ್ ಸೂಚ್ಯಂಕ (BI) ಮೇಲೆ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ತನಿಖೆ ಮಾಡಲಾಯಿತು. ಫಲಿತಾಂಶಗಳನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕ 1 ರಲ್ಲಿ ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡದ ಮತ್ತು ಸಂಸ್ಕರಿಸದ ಎರಡೂ ಗುಂಪುಗಳಲ್ಲಿನ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಮಾದರಿಗಳ BI ಕ್ರಮೇಣ ಹೆಚ್ಚುತ್ತಿರುವ ಪ್ರವೃತ್ತಿಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ. BI ಕಂದುಬಣ್ಣದ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಿಂಬಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಹೀಗೆ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸಬಹುದುಒಂದು ಪ್ರಮುಖಕಿಣ್ವಕ ಮತ್ತು ಕಿಣ್ವಕವಲ್ಲದ ಕಂದುಬಣ್ಣದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಸೂಚಕ. ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು (P < 0.05). ಶೇಖರಣೆಯ ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ,ಎ420ನಿಯಂತ್ರಣ ಮತ್ತು ಕಿಣ್ವ-ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಗುಂಪುಗಳಲ್ಲಿ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಮಾದರಿಗಳ ಮೌಲ್ಯವು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಸುಮಾರು 217% ಮತ್ತು 121% ರಷ್ಟು ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ (ಕೋಷ್ಟಕ 1). ಕಿಣ್ವ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಕಂದುಬಣ್ಣದ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಸುಮಾರು 56% ರಷ್ಟು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಎಂದು ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಸೂಚಿಸುತ್ತವೆ. ಬೆಜೆರಾ ಮತ್ತು ಇತರರ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು.[19]] ನಮ್ಮ ಫಲಿತಾಂಶಗಳೊಂದಿಗೆ ಸ್ಥಿರವಾಗಿವೆ; ಅವರು ಸೇಬಿನ ರಸವನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟಪಡಿಸಲು ಲ್ಯಾಕೇಸ್-ಗ್ಲುಟರಾಲ್ಡಿಹೈಡ್-ತೆಂಗಿನ ನಾರನ್ನು ಬಳಸಿದರು, ಅದರ ಮೂಲ ಬಣ್ಣವನ್ನು 61% ರಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿದರು.
ಹಣ್ಣಿನ ರಸಗಳಲ್ಲಿರುವ ಪಾಲಿಫಿನಾಲ್ಗಳು ಮಾನವ ದೇಹದ ಮೇಲೆ ಸಕಾರಾತ್ಮಕ ಪೌಷ್ಟಿಕಾಂಶ ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದ್ದರೂ, ಅವು ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸಬಹುದು, ರಸದ ಮೋಡ, ಸೆಡಿಮೆಂಟೇಶನ್ ಅಥವಾ ಟರ್ಬಿಡಿಟಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು, ಇದರಿಂದಾಗಿ ಉತ್ಪನ್ನದ ರುಚಿ ಮತ್ತು ಪರಿಮಳವನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸಬಹುದು ಮತ್ತು ಅದರ ಶೆಲ್ಫ್ ಜೀವಿತಾವಧಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬಹುದು.71ಪ್ಲೆರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್ NRC 620 ರಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಬಳಸಿ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತ ಅಂಶವನ್ನು ಸುರಕ್ಷಿತವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವುದು ಈ ಅಧ್ಯಯನದ ಉದ್ದೇಶವಾಗಿತ್ತು. ಕೋಷ್ಟಕ 1 ರಲ್ಲಿ ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸಲಾದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ಲ್ಯಾಕೇಸ್-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಒಟ್ಟು ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತ ಅಂಶವು 4 °C ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸುವ ಮೊದಲು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದ ಎರಡೂ ಮಾದರಿಗಳಲ್ಲಿ ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟು ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತ ಅಂಶವು ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ (ಕೋಷ್ಟಕ 1). ಸ್ಯಾಂಡ್ರಿ ಮತ್ತು ಇತರರಿಂದ ಸಂಶೋಧನೆ.72ಕಿಣ್ವ-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಸೇಬಿನ ರಸವು ಅದರ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತ ಅಂಶವನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳಬಹುದು ಎಂದು ತೋರಿಸಿದೆ. ಆದಾಗ್ಯೂ, ಲೆಟೆರಾ ಮತ್ತು ಇತರರು ನಡೆಸಿದ ಅಧ್ಯಯನದ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು.73ಕಿತ್ತಳೆ ರಸವನ್ನು ಶಿಲೀಂಧ್ರ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡುವುದರಿಂದ ಅದರಲ್ಲಿರುವ ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಅಂಶವು 45% ವರೆಗೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.
ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳು ಸ್ವತಂತ್ರ ರಾಡಿಕಲ್ ಸ್ಕ್ಯಾವೆಂಜಿಂಗ್, ಸಿಂಗಲ್ಟ್ ಆಮ್ಲಜನಕ ಕಡಿತ ಮತ್ತು ತಣಿಸುವಿಕೆ, ಹೈಡ್ರೋಜನ್ ಪರಮಾಣು ವರ್ಗಾವಣೆ ಮತ್ತು ಸ್ವತಂತ್ರ ರಾಡಿಕಲ್ಗಳಿಗೆ ಎಲೆಕ್ಟ್ರಾನ್ ದಾನದಂತಹ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿವೆ ಎಂದು ತೋರಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಅವುಗಳನ್ನು ಪ್ರಬಲವಾದ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕಗಳನ್ನಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ.74ಆದ್ದರಿಂದ, ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, 14 ದಿನಗಳವರೆಗೆ ರೆಫ್ರಿಜರೇಟರ್ನಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಲಾದ ಸೇಬಿನ ರಸದ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನ ಮಾಡಲು DPPH ಮತ್ತು FRAP-ಆಧಾರಿತ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಯಿತು (ಕೋಷ್ಟಕ 2). ಎರಡೂ ವಿಧಾನಗಳು ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಳವನ್ನು ತೋರಿಸಿವೆ, ಇದು ಉಚಿತ ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳ ಹೆಚ್ಚಳ ಅಥವಾ ಮೈಲಾರ್ಡ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ಉತ್ಪನ್ನಗಳ (MRPs) ರಚನೆಯಿಂದಾಗಿರಬಹುದು, ಮೈಲಾರ್ಡ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಾ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಹೆಚ್ಚಳಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು.75ಕಿಣ್ವಕವಲ್ಲದ ಕಂದುಬಣ್ಣದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು (ಆಸ್ಕೋರ್ಬಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಅವನತಿ, ಮೈಲಾರ್ಡ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಸಕ್ಕರೆಗಳ ಆಮ್ಲ-ವೇಗವರ್ಧಕ ಅವನತಿ ಸೇರಿದಂತೆ) ಕಂದು ವರ್ಣದ್ರವ್ಯಗಳನ್ನು (ಮೆಲನಾಯ್ಡಿನ್ಗಳು) ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತವೆ. ಮಧ್ಯಂತರ ಆಸ್ಕೋರ್ಬಿಕ್ ಆಮ್ಲದ ಅವನತಿ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು ಮತ್ತು ಸಕ್ಕರೆಯ ಅವನತಿ ಉತ್ಪನ್ನಗಳು (ಕಾರ್ಬೊನಿಲ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳಂತಹವು) ಮೈಲಾರ್ಡ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಮೂಲಕ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳೊಂದಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯಿಸಬಹುದು.76ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಹಣ್ಣುಗಳು ಮತ್ತು ತರಕಾರಿಗಳು ಕಂದು ಬಣ್ಣಕ್ಕೆ ತಿರುಗುವುದನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಗಿದ್ದರೂ, ಈ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಬಗ್ಗೆ ನಮ್ಮ ತಿಳುವಳಿಕೆ ಸೀಮಿತವಾಗಿದೆ.77FRAP ವಿಧಾನಕ್ಕೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಲ್ಯಾಕೇಸ್-ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದ ಸೇಬಿನ ರಸವು DPPH ವಿಧಾನದಿಂದ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ತೋರಿಸಿದೆ (ಕೋಷ್ಟಕ 2), ಮತ್ತು ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯ ಹೆಚ್ಚಾದಂತೆ ಎಲ್ಲಾ ಮಾದರಿಗಳ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಾಯಿತು. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಎರಡು ವಿಭಿನ್ನ ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗಿದೆ ಏಕೆಂದರೆ ಅವುಗಳ ತತ್ವಗಳು ಭಿನ್ನವಾಗಿವೆ. DPPH ವಿಧಾನವು ಸ್ವತಂತ್ರ ರಾಡಿಕಲ್ಗಳನ್ನು ತಟಸ್ಥಗೊಳಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಅಳೆಯುತ್ತದೆ, ಆದರೆ FRAP ವಿಧಾನವು ಕಬ್ಬಿಣದ ಅಯಾನುಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಅಳೆಯುತ್ತದೆ. ಆದ್ದರಿಂದ, ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದ ಮಾದರಿಗಳ ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಅರ್ಥಮಾಡಿಕೊಳ್ಳಲು ಉತ್ಕರ್ಷಣ ನಿರೋಧಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಬಹು ವಿಧಾನಗಳನ್ನು ಬಳಸಲು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಲಾಗಿದೆ.78
ಈ ಅಧ್ಯಯನದ ಪ್ರಮುಖ ಸಂಶೋಧನೆಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾದ *ಪ್ಲ್ಯುರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* ಲ್ಯಾಕೇಸ್ NRC 620 70°C ಮತ್ತು pH 3.0 ನಲ್ಲಿ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ. *ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ವರ್ಸಿಕಲರ್* ಮತ್ತು *ಗ್ಯಾನೋಡರ್ಮಾ ಲುಸಿಡಮ್* ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳಂತಹ ರಸ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಇತರ ಶಿಲೀಂಧ್ರ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, *P. ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* NRC 620 ಹೆಚ್ಚಿನ ಉಷ್ಣ ಸ್ಥಿರತೆ ಮತ್ತು ಹೆಚ್ಚು ಆಮ್ಲೀಯ pH ಅನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ. *ಟ್ರಾಮೆಟ್ಸ್ ವರ್ಸಿಕಲರ್* ಮತ್ತು *ಗ್ಯಾನೋಡರ್ಮಾ ಲುಸಿಡಮ್* ನಿಂದ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 50-60°C ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಮತ್ತು 3.5 ಮತ್ತು 5.0 ರ ನಡುವಿನ pH ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ತ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ. ಈ ವ್ಯತ್ಯಾಸವು ಸುಧಾರಿತ ರಸ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣ ದಕ್ಷತೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ pH ಮೌಲ್ಯಗಳಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರತೆ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿರುವ ಆಮ್ಲೀಯ ರಸಗಳಿಗೆ. *P ಯ ವಿಶಿಷ್ಟ ಲಕ್ಷಣವೆಂದರೆ ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾದ ಇತರ ಶಿಲೀಂಧ್ರ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, *ಪ್ಲ್ಯುರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* NRC 620 ಹೆಚ್ಚು ಸವಾಲಿನ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿಯಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತದೆ. ಇದರ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸೂಕ್ತ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಉಷ್ಣತೆಯು ಕೈಗಾರಿಕಾ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳಲ್ಲಿ ವೇಗವಾದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆ ದರಗಳು ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆಯಾದ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಯ ಮಾಲಿನ್ಯದಂತಹ ಸಂಭಾವ್ಯ ಪ್ರಯೋಜನಗಳನ್ನು ಸೂಚಿಸುತ್ತದೆ. ಇದರ ಕಡಿಮೆ pH, ಅನೇಕ ರಸಗಳ ಆಮ್ಲೀಯ ಸ್ವಭಾವಕ್ಕೆ ಚೆನ್ನಾಗಿ ಹೊಂದಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ, ಇದು ರಸ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಗಳಲ್ಲಿ ಉಪಯುಕ್ತವಾಗಬಹುದು. ಈ ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ದೊಡ್ಡ ಪ್ರಮಾಣದ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಾಗಿ ಮತ್ತಷ್ಟು ಪರಿಶೋಧನೆಯನ್ನು ಸಮರ್ಥಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು *ಪ್ಲುರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* NRC 620 ಅನ್ನು ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಶಿಲೀಂಧ್ರ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಮೂಲಗಳಿಗೆ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯವಾದ ಪರ್ಯಾಯವನ್ನಾಗಿ ಮಾಡುತ್ತದೆ. ಹಿಂದಿನ ಅಧ್ಯಯನಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಸೂಕ್ತ ತಾಪಮಾನವು 60°C ಮತ್ತು ಸೂಕ್ತ pH 3.0 ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ. 60°C ನಲ್ಲಿ 80 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯ ನಂತರ, *ಗ್ಯಾನೋಡರ್ಮಾ ಲುಸಿಡಮ್* ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಅನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗಿದೆ.46ಅದರ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಶೇ.79 ಕುರ್ನಿಯಾವತಿ ಮತ್ತು ನಿಸೆಲ್ ಪ್ರಕಾರ80, *ಗ್ಯಾನೋಡರ್ಮಾ ಲುಸಿಡಮ್* ಕಿಣ್ವಗಳು 25°C ಮತ್ತು pH ಮೌಲ್ಯಗಳು 5.0 ರಿಂದ 8.0 ವರೆಗಿನ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಅತ್ಯುತ್ತಮದಿಂದ ಮಧ್ಯಮ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ, ಮತ್ತು pH 6.0 ಮತ್ತು 10 ರಿಂದ 30°C ವರೆಗಿನ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ. ಈ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ, *ಪ್ಲುರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್* ಗೆ ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ pH ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನವು ಕ್ರಮವಾಗಿ 3.0 ಮತ್ತು 70°C ಎಂದು ನಾವು ಕಂಡುಕೊಂಡಿದ್ದೇವೆ. 40°C ಮತ್ತು 50°C ನಲ್ಲಿ ಎರಡು ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವುಕೊಟ್ಟ ನಂತರ, ಕಿಣ್ವವು ಕ್ರಮವಾಗಿ 68.33% ಮತ್ತು 59.61% ನಷ್ಟು ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಉಳಿಸಿಕೊಂಡಿದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಪ್ಲುರೋಟಸ್ ಆಸ್ಟ್ರೀಟಸ್ NRC 620 ಲ್ಯಾಕೇಸ್ 50°C ನಿಂದ 80°C ವರೆಗಿನ ವಿಶಾಲ ತಾಪಮಾನದ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿತು, ಬಹುತೇಕ ಗರಿಷ್ಠ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು (69%–98%) ತಲುಪಿತು, ಗರಿಷ್ಠ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು 70°C ನಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು.
ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, ಸ್ಥಿರ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಪಡೆದ ಸಿಂಪಿ ಮಶ್ರೂಮ್ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ NRC620, ವಿವಿಧ pH ಮತ್ತು ತಾಪಮಾನದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಅತ್ಯುತ್ತಮ ಚಟುವಟಿಕೆ ಮತ್ತು ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿತು, ಇತರ ಕಿಣ್ವ ಮೂಲಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ ಉತ್ತಮ ಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸಿತು. 10 mM MgSO₄ ಮತ್ತು CuSO₄ ಸೇರ್ಪಡೆಯು ಕಿಣ್ವ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಕ್ರಮವಾಗಿ ಸುಮಾರು 21% ಮತ್ತು 35% ರಷ್ಟು ಹೆಚ್ಚಿಸಿತು. ಸೇಬಿನ ರಸವಾಗಿ ಸಂಸ್ಕರಿಸಿದಾಗ, ಕಿಣ್ವವು pH ಮತ್ತು ಸ್ನಿಗ್ಧತೆಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಿತು, ಆದರೆ ಶೇಖರಣಾ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಫೀನಾಲಿಕ್ ಅಂಶವು ಸ್ವಲ್ಪ ಕಡಿಮೆಯಾಯಿತು.
ಆಹಾರ ಉದ್ಯಮದಲ್ಲಿ, ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಪಾನೀಯ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣದಲ್ಲಿ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ನ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವನ್ನು ಫಲಿತಾಂಶಗಳು ದೃಢಪಡಿಸುತ್ತವೆ. ಫೀನಾಲಿಕ್ ಸಂಯುಕ್ತಗಳನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಒಡೆಯುವ ಮೂಲಕ, ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಟರ್ಬಿಡಿಟಿಯನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸ್ಪಷ್ಟತೆಯನ್ನು ಸುಧಾರಿಸುತ್ತದೆ ಮಾತ್ರವಲ್ಲದೆ ಸೌಮ್ಯವಾದ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಹಣ್ಣಿನ ರಸಗಳ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ಸಹ ನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಜೆಲಾಟಿನ್, ಬೆಂಟೋನೈಟ್ ಮತ್ತು ಸಿಲಿಕಾ ಜೆಲ್ನಂತಹ ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕ ಸ್ಪಷ್ಟೀಕರಣ ಏಜೆಂಟ್ಗಳಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿ, ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ತ್ಯಾಜ್ಯವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವುದಿಲ್ಲ ಅಥವಾ ಪಾನೀಯಗಳಿಂದ ಆಹ್ಲಾದಕರ ಸುವಾಸನೆಯನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವುದಿಲ್ಲ, ಇದು ಹೆಚ್ಚು ಪರಿಸರ ಸ್ನೇಹಿ ಮತ್ತು ಸುಸ್ಥಿರ ಆಯ್ಕೆಯಾಗಿದೆ. ಇದಲ್ಲದೆ, ಇತರ ಕಿಣ್ವಗಳು ಮತ್ತು ಶೋಧನೆ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಹೋಲಿಸಿದರೆ, ಲ್ಯಾಕೇಸ್ ಉತ್ಪನ್ನದ ಗುಣಮಟ್ಟವನ್ನು ರಾಜಿ ಮಾಡಿಕೊಳ್ಳದೆ ಉದ್ದೇಶಿತ ಮತ್ತು ವೆಚ್ಚ-ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಪರಿಹಾರವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ.
ಕ್ಯೋಮುಹಿಂಬೊ, ಎಚ್ಡಿ ಮತ್ತು ಬ್ರಿಂಕ್, ಎಚ್ಜಿ. ತಾಮ್ರ-ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಲ್ಯಾಕೇಸ್ಗಳ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳು ಮತ್ತು ನಿಶ್ಚಲತೆಯ ತಂತ್ರಗಳು; ಒಂದು ವಿಮರ್ಶೆ. ಹೆಲಿಯಾನ್ 9, ಇ13156 (2023).
ಪೋಸ್ಟ್ ಸಮಯ: ಡಿಸೆಂಬರ್-15-2025